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福建省重要杨桃种类遗传多样性剖析

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  择要:接纳RAPD技能对17份杨桃种类资源举行遗传多样性剖析。结果评释,13条随机引物共扩增出80条RAPD带,此中77条为多态性带,均匀多态位点5.92条,多态率达97.19%,评释杨桃遗传多样性的庞大性。使用UPGMA构建了杨桃的亲缘干系树状图,遗传间隔为0-2.16093,当λ=2.08时,17份杨桃种类可以分别为3个类群,第Ⅰ类群中的杨桃种类基本都属于甜杨桃种类,第Ⅱ类群中的杨桃种类既包罗了甜杨桃也包罗了酸杨桃种类,第Ⅲ类群中则只包罗了云霄3号一个种类。
中国论文网 /8/view-13658761.htm
  要害词:杨桃(Averrhoa carambola L);RAPD;遗传多样性
  中图分类号:S667.91 文献标识码:A 文章编号:1009-9980(2011)03-448-05
  
  杨桃(Averrhoa cararabola L.)又名阳桃、三稔子、洋桃等,属南边寒带名果之一。杨桃果实多汁、养分富厚,除鲜食外,还可加工结果酱、蜜饯等,别的还具有祛风热、生津止渴、止血生肌等药效。杨桃分甜杨桃和酸杨桃,此中甜杨桃是久负盛名的岭南佳果之一,原产于亚洲西北部寒带亚寒带地域,从前以零散引入我国,部门成为中央精良种类。由于甜杨桃质软味甜,养分富厚,具有较高的医药代价和食疗结果,越来越受人们的喜好。
  福建省甜杨桃种类泉源重要是经过台商带出去,尚未展开过官方引种,由于受某些历史和人为要素影响,及引进杨桃种类的台商缺乏相应的专业知识,使得现在福建省甜杨桃同名异种或同种异名征象非常严峻,全省现有几多甜杨桃种类尚是个未知数,这给全省甜杨桃财产的劣种选育和推行带来了很大的困难,既倒霉于种类产权的掩护,也倒霉于甜杨桃财产的可连续生长。RAPD(Random Amplification of Polymorphic DNA,随机扩增多态性DNA)技能作为一种简朴、疾速、正确和敏捷度高的分子标志技能,曾经遍及使用于荔枝、枇杷、余甘子、桑树、苹果、苦瓜、梨、树莓和桃等动物上。但至今尚未见对杨桃遗传多样性的体系剖析。鉴于此,我们拟使用RAPD技能举行杨桃资源的遗传多样性剖析和种类范例的分类判定,盼望为杨桃分类品级尺度的创建提供根据。
  
  1、质料和要领
  
  1.1 质料
  共收罗了17份杨桃种类的嫩叶,质料见表1。
  
  1.2 试剂与仪器
  Taq DNA聚合酶、dNTP Mix、10xPCR Buffer均购自上海英骏生物技能无限公司,引物由上海生工生物工程技能办事无限公司分解。PCR仪(Tgradient)为德国whatman Biometra公司产物;电泳仪(192型)为美国Bio-Rad公司产物。
  
  1.3 要领
  1.3.1 杨桃叶片基因组DNA制备 接纳CTAB法(Hexadecyhfimethylammonium-bromide)提取DNA。
  1.3.2 RAPD剖析 从138条RAPD随机引物中挑选出13条能得到清楚多态性条带且反响稳固的引物。PCR扩增反响在25μL反响体系中举行,体系中包罗1UToq酶,2.5μL 10xPCR Buffer,0.5μL dNTP(10 mmol・L-1),1.0μL RAPD引物(10μmol・L-1),DNA模板25 ng。PCR反响步伐为94℃预变性4min,然后40个循环,每个循环的步伐为94℃变性1min,38℃复性90 s,72℃延伸2 min;末了72℃延伸10min,扩增竣事后,取7μLPCR产品举行1.5%琼脂糖凝胶电泳以查抄扩增结果,在凝胶成像体系(美国UVP)上视察并储存图像。
  1.3.3 数据剖析 参照RAPD扩增结果的琼脂糖凝胶电泳图谱,每一条DNA带均为一个分子标志,并代表一个引物联合位点。有带计为“1”,无带计为“0”,强带和弱带均计为“1”,构成“0-1”数据矩阵。将所得数据输出DPS数据处置惩罚体系,以类均匀法(UPGMA)对数据举行聚类剖析,并主动天生17份杨桃质料的遗传聚类图。统计各引物的多态条带百分率。
  
  2、结果与剖析
  
  2.1 RAPD引物挑选
  对138条随机引物(10 bp寡聚核苷酸)举行了挑选(S2-S130;S190-S199)。挑选多态性好,条带清楚而且比力稳固的引物作为进一步的RAPD剖析。13条随机引物辨别为:S5,S24,S29,S97,S33,S103,S113,S118,S122,S123,S126,S199和S197(图1)。
  
  
  
  2.2 RAPD多态性剖析
  随机引物对17份杨桃种类举行的RAPD扩增结果见表2。此中引物S103,S29和S113扩增的图谱见图2-4。由图2-4可知,统一引物在差别种类杨桃质料中扩增出差别的谱带,证明所提取的DNA可以用于RAPD剖析。13条随机引物共孕育发生80条RAPD带,差别引物得到的扩增带在4-11条,均匀6.15条,引物S197扩增的条带最多,为11条,S118和S199扩增的条带数目最少,均为4条。在所扩增条带中,此中77条为多态性带,均匀多态位点5.92条,多态率达97.19%。差别引物所扩增出的条带数差别。统一引物、差别资源间扩增出的带数也不雷同,反应了17份杨桃资源之间富厚的多态性和庞大的遗传配景。这不但为剖析杨桃的亲缘干系提供大概,同时评释杨桃遗传多样性和遗传配景的庞大性。
  
  2.3 聚类剖析
  17份杨桃遗传间隔为0-2.16093,此中,杨桃(果树所)和杨桃(福州)遗传间隔是0,评释,他们之间基本无遗传差别,大概为统一种类。
  当λ=2.08时,17份杨桃可以分别为3个类群:第1类群包罗二林种、马来西亚B17、台农1号、马来西亚B10、秤锤种和青干厚敛;第Ⅱ类群包罗黄金香、红龙、泰国种、台湾软枝、云霄2号、红藤、云霄1号、杨桃(云霄)、杨桃(福州)和杨桃(果树所);第Ⅲ类群包罗云霄3号(图5)。凭据杨桃可以分别为甜杨桃和酸杨桃2大类,聚类剖析结果评释,第1类群中的杨桃种类基本都属于甜杨桃种类,第Ⅱ类群中的杨桃种类既包罗了甜杨桃也包罗了酸杨桃种类。
  
  
  
  
  3、讨论
  
  比年来,我国南亚寒带地域和寒带地域鼎力大举生长杨桃消费,从台湾和马亚西亚引进不少精良种类,极大地富厚了我国的杨桃种质资源。Frankel即是1984年最早提出焦点种质(core collection)的观点。焦点种质应包罗尽大概多的生态和遗传多样性。焦点种质的构建不但办理富厚的遗传资源质料的生存、评价、判定及使用带来的困难。可以节省少量地皮和少量的种子资源办理用度,并且有利于网络、办理、种质创新及资源的深条理研讨,大大进步种质资源的使用服从。关于焦点种质的研讨事情曾经有许多报道,在花生、豌豆(Pisum sativum L)和 小麦等几十莳植物上曾经创建焦点种质。对杨桃的RAPD剖析结果评释,当λ=2.08时。17份杨桃种类可以分别为3个类群:第Ⅰ类群中的杨桃种类基本都属于甜杨桃种类,第Ⅱ类群中的杨桃种类既包罗了甜杨桃也包罗了酸杨桃种类。第Ⅲ类群中则只包罗了云霄3号一个种类。对杨桃种类举行的RAPD剖析结果对杨桃焦点种质简直定具有紧张的参考代价,固然完备的焦点种质构建还必要联合其他要领进一步美满。
  福建省原有的杨桃种类多为酸杨桃,不宜间接食用,因此杨桃在福建省基本没有大的生长。比年来,随着闽台农业交换的深化,从台湾引进了一些杨桃种类,但由于差别种类杨桃在形状上的类似性,以及在引种时遭到某些历史和人为要素的影响,使得现在福建省甜杨桃同名异物或同物异名征象非常严峻。经过RAPD剖析,我们发明,第1类群包罗了6个杨桃种类,此中,福建省的马来西亚B17和马来西亚B10种类均从台湾引进和挑选,这2个种类原产于马来西亚,均为较好的甜杨桃种类。二林种(又名蜜丝软枝、软枝种)、青干厚敛、秤锤种和台农1号也均为甜味杨桃种类。在第Ⅱ类群中的台湾软枝又称台农1号,代号6301,系台湾凤山寒带园艺实验使用二林种、蜜丝种与歪尾种混植天然杂交,为二林种实生子女选育而得,属于红龙系列杨桃,与红龙属于统一种类的杨桃。但遗传间隔剖析评释台湾软枝(又称台农1号,代号6301)与本文中的台农1号遗传间隔相差甚远,阐明福建省台湾软枝和台农1号这2个杨桃种类很大概存在同名异种征象。而杨桃(果树所)和杨桃(福州)遗传间隔是0,评释,他们之间基本无遗传差别,大概为统一种类。RAPD技能为区分同名异种大概同种异名的杨桃种类提供了肯定的根据,但是,要进一步判定差别杨桃种类,还必要联合形状特性的剖析。
  RAPD最早由Williams等和Welsh等提出,该技能无需事前明白被剖析质料的基因组布局,且其引物联合位点在基因组中随机漫衍。可以或许较为片面展现种质资源的遗传特性。别的,该技能在正确控制扩增条件的条件下,异样具有较高的稳固性和可反复性,得当展开亲缘干系较近的遗传质料的遗传多样性研讨。使用RAPD技能对杨桃举行剖析结果评释,在所扩增的条带中,此中77条为多态性带,均匀多态位点5.92条,多态率达97.19%,同时可以看出,差别的引物所扩增出的条带数差别:统一引物、差别资源间扩增出的带数也不雷同,反应了17份杨桃种类资源之间富厚的多态性和庞大的遗传配景,这不但为剖析杨桃的亲缘干系提供大概,同时评释杨桃遗传多样性和遗传配景庞大性。

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